Исследование фармакокинетики и биодоступности Масла семян Коикс(Скачать)

Ма Юаньмин¹, Шень Канкэ²
1.Фармацевтический колледж Шанхайского медицинского университета
2 .Колледж традиционной китайской медицины, Чжецзян

Введение

          Семена Коикс – высушенные семена, полученные при удалении твердой шелухи с плодов Коикс (>coix Lachryma-jobi L Var. Mayuen Stapf.). Они принадлежат к семейству сложноцветных и используются в традиционной медицине тысячи лет. За многие годы было замечено, что семена коикс значительно ингибируют эффекты асцитной карциномы и HCA солидной карциномы. Более того, было фармакодинамически доказано, что эффективное противоопухолевое масло семян коикс, экстрагированное из семян коикс путем долгих технологических исследований, обладает широким спектром действия в ингибировании и уничтожении раковых клеток, уничтожая патогенетические факторы. Препарат для внутривенного применения, полученный из него, используется в клинике и дает хорошие лечебные эффекты при раке легкого, печени и т.д. Для дальнейшего исследования механизмов действия препарата масла семян коикс и его фармакокинетики, оно было помечено в соответствии со структурными характеристиками тритием. Определяли биодоступность и фармакокинетику различных препаратов, применяемых in vivo. Были определены всасывание, распределение, выведение и метаболизм масла семян коикс.

Резюме

             Фармакодинамику, всасывание, распределение, выведение и метаболизм масля семян коикс, меченого тритием, изучали у крыс. Наблюдали процессы при введении крысы ³Н-масло семян коикс путем желудочной перфузии и внутривенной инъекции в хвостовую вену. Период полувыведения составлял 14,23 ч при внутривенном применении и 15,84 ч при желудочной перфузии. Процент биодоступности при желудочной перфузии по отношению к внутривенному введению составил в AUC > 62 %. ³Н-масло семян коикс, введенное в тело мыши, распределилось по всем органам (главным образом в печени и селезенке). Это обеспечивает некоторую теоретическую основу для клинического применения. 40,6 % препарата выводилось с калом и 59,4 % – с мочой. Общий выход оригинального введенного препарата за 24 ч составил 38,29 %. Связывание с белками плазмы крови ³Н-масла семян коикс – 98,4.
 Ключевые слова: ³Н-масло семян коикс, фармакокинетика, биодоступность, гистологическое распределение.

1.Материалы

1.1. Животные

           Крысы-альбиносы серии SD, весом 180±20 г, одинаковое количество самцов и самок.
           Мыши Kunmimg, весом 20±2 г, одинаковое количество самцов и самок.
           Поставщик: Shanghai Research Inctitute of Pharmaceutical Industry (Шанхайский исследовательский институт фармацевтической индустрии).

1.2. Препараты и вспомогательные вещества

          Масло семян коикс (предоставлено KANGLAITE Pharmaceutical Co., Ltd., Batch No.: 96100, content: 99,75).
           ³Н-масло семян коикс (помечено в Nuclear Institute of Chinese Academy of Sience – ядерный институт Китайской академии наук).
         Соевый лецитин (производство Shanghai Pujiang Phospholipid Factory).
         Твин-80 (используется в фармации).
         70% хлорная кислота, эфир (AR), PRO ксилен сцинтиллятор, POPOP сцинциллятор, 30% Н₂О₂, октанол (AR).

1.3. Инструменты и приборы

            Микровесы, Beckman LS 9800, сцинцилляционная жидкость (Е>48 %), высокоскоростной гомогенизатор, пластины с силикагелем GF, приборы для вскрытия, приборы для радиационной защиты и т.д.

2. Методы

2.1. Приготовление ³Н-масла семян коикс для внутривенного введения

          Смесь из ³Н-масла семян коикс, соевого фосфолипида, глицирина и дистиллированной воды гомогенизировали до состояния эмульсии в высокоскоростном гомогенизаторе. Затем эмульсию взбалтывали, разливали в контейнеры, стерилизовали паром и измеряли ее радиоактивность.

2.2. Приготовление ³Н-масла семян коикс для перорального примерения

          ³Н-масла семян коикс разбавляли и хорошо перемешивали с дистиллированной водой и твином-80, а затем измеряли радиоактивность.

2.3. Приготовление биологических образцов

2.3.1. Образцы крови

              Кровь (0,1 мл) забирали у крыс и мышей в трубки для образцов. Добавляли гепарин в качестве антикоагулянта, а затем 70% хлорную кислоту (0,5 мл) и 30% Н₂О₂ (0,1 мл). Образцы настаивали на водяной бане при 80 ?С в течение 30 минут. Затем добавляли дистиллированную воду для доведения объема до 1 мл и далее брали 0,1 мл образца, встряхивали и помещали в сцинтилляционный флакон для измерения.

2.3.2. Гистологические образцы

          Мышей умерщвляли путем перелома шейных позвонков. Их внутренние органы промывали в физиологическом растворе и промокали бумажным фильтром. 100 мг каждого органа брали в качестве образца. Затем добавляли 70% хлорную кислоту (0,5 мл), 30% Н₂О₂ (0,1 мл) и 1 каплю октанола. Образцы настаивали на водяной бане при 80 ?С в течение 60 минут, пока они были прохладными. Затем добавляли дистиллированную воду для доведения объема до 1 мл и далее брали 0,1 мл образца, встряхивали, помещали в сцинтилляционный флакон для измерения.

2.3.3. Образцы кала и мочи

         Образцы кала (100 мг) и мочи (0,1 мл) брали в разные периоды. Затем в образцы добавляли 70% хлорную кислоту (0,5 мл), 30% Н₂О₂ (0,1 мл) и 4 капли октанола. Образцы настаивали на водяной бане при 80 ?С в течение 60 минут. Затем добавляли дистиллированную воду до объема 5 мл и 0,1 мл образца помещали в сцинтилляционный флакон для измерения.

2.3.4. Измерение излучения

          После настаивания образец (0,1 мл) помещали в сцинтилляционный флакон, добавляли 9 мл РРО и измеряли радиоактивность.

3. Результаты

3.1. Сравнение биодоступности ³Н-масла семян коикс для внутривенного применения и его пероральной лекарственной формы.

          12 крыс, самцы и самки, были рандомизированно разделены на 2 группы (по 6 крыс в каждой группе). Животных взвесили, перед экспериментом их в течение 24 ч не кормили. Двум группам крыс вводили эмульсию ³Н-масла семян коикс (0,5 мл, 0,25 г/кг) в хвостовую вену и через желудочную перфузию. Через 1; 10; 30; 60; 120; 240; 480; 720; 1140 минут после применения препарата у крыс брали образцы крови. После того, как образцы крови настаивались, измеряли их радиоактивность для получения AUC значения.
AUC:
0---------Т[n]
AUC=пероральное применение/внутривенное применение
0-Т=3941,83 мг/635 7,8 мг=61,9 %
0---------бесконечность
AUC= пероральное применение/внутривенное применение
0-- 5016.5342 мг/8077.5273 мг=62,1 %

3.2. Концентрация препарата и фармакокинетические параметры внутривенной лекарственной формы ³Н-масла семян коикс при однократном применении.

18 крыс линии SD были точно и рандомизированно разделены на 3 группы. Этим группам животных вводили препараты ³Н-масла семян коикс (0,25 г/кг, 0,125 г/кг и 0,0625 г/кг) в хвостовую вену. После введения у крыс брали образцы крови (0,1 мл) через 0,0167; 0,167; 0,5; 1,2; 4; 8; 12; 24 ч. После подготовки образцов крови измеряли и подсчитывали их фармакокинетические параметры.

Таблица 1. Результат измерения концентрации препарата у крыс после внутривенной инъекции при разных дозах и разном времени

Таблица 2. Фармакокинетические параметры внутривенного применения ³Н-масла семян коикс у крыс

3.3. Концентрация препарата и фармакокинетические параметры пероральной лекарственной формы ³Н-масла семян коикс при однократном применении

18 крыс линии SD были точно и рандомизированно разделены на 3 группы, которым перорально путем желудочной перфузии ввели ³Н-масло семян коикс (0,25 г/кг, 0,125 г/кг и 0,0625 г/кг). После чего у крыс брали образцы крови через 0,0167; 0,167; 0,5; 1; 2; 4; 8; 12; 24 ч. Когда образцы крови были подготовлены, измеряли и подсчитывали их фармакокинетические параметры.

Таблица 3. Результат измерения концентрации перорального препарата у крыс при разных дозах и разном времени

Таблица 4. Фармакокинетические параметры применения перорального препарата ³Н-масла семян коикс у крыс

3.4. Гистологическое распределение внутривенного препарата ³Н-масла семян коикс при единичном применении

          54 мыши линии Kunming species были точно и рандомизированно разделены на 9 групп (по 6 мышей в каждой). Мышам в хвостовую вену вводили ³Н-масло семян коикс (0,25 г/кг). В течение 0,0167; 0,167; 0,5; 1; 2; 4; 8; 12; 24 ч убивали по 1 группе мышей. У каждой мыши брали по 100 мг тканей крови, печени, селезенки, почек, легких, желудка, мозга и кишечника. После смешивания ткани были точно измерены и подготовлены, после чего произвели измерение и подсчет радиоактивности.

3.5. Выделение

            5 мышей Kunming species были помещены в 5 метаболических клеток. Мышам в хвостовую вену ввели ³Н-масло семян коикс (0,25 мг/кг). У каждой мыши в разные периоды регулярно собирали образцы мочи (0,1 мл) и кала (100мг). Затем измеряли радиоактивность в периоды 0-4 ч, 4-8 ч, 8-12 ч и 12-24 ч.

Таблица5

*Общее выведение: 2275 мг + 1554 мг = 3829 мкг
Каждой мыши вводили 10 мг
Процентное отношение выведенного количества к общему введенному количеству:
382мг/10мг=38,29 %, включая 59,4 % в моче и 40 % в кале.

Таблица 6

*данные в таблице показывают процентное отношение выведенного количества к введенной дозе.

3.6. Степень связывания с белками плазмы

3.6.1 In vitro

        После добавления к образцу крови (1 мл), полученному от нормальной не леченой мыши, ³Н-масла семян коикс (50 мл) и 30% ТСА, смесь центрифугировали, осаждали и измеряли радиоактивность в надосадочной жидкости и в осадке. Среднее значение радиоактивности: надосадочная жидкость – 5515, осадок – 340765. Степень связывания: 340765/340765+5515?100 %=98,4 %.

3.6.2 In vivo

            ³Н-масло семян коикс той же партии, что и в 3.6.1, вводили каждой мыши. Через 4 ч забирали кровь и добавляли к ней 30% ТСА. Смесь центрифугировали, осаждали и измеряли радиоактивность в надосадочной жидкости и в осдаке.
         Среднее значение радиоактивности: надосадочная жидкость – 2547, осадок 10523. Степень связывания: 10523/2347+10523?100 %=80,5 %.

4. Обсуждение

4.1. Выбор метода измерения

              Масло семян коикс обладает сильным лечебным эффектом против рака. Для изучения метаболизма и всасывания этого препарата были выбраны радиоактивные изотопы. Избыток трития был добавлен, чтобы отметить все двойные связи у ненасыщенных жирных кислот. Меченый компонент не только имеет свои физические и химические свойства, но также имеет свойства радиоактивного нуклеина, поэтому его движение и расположение в теле может быть отслежено. Так как нуклеин имеет собственные химические и биологические свойства, уместные и общие для атомов и молекул в природе, его химические изменения в теле те же, что и при биологическом процессе. Свойства метода радиоактивного ³Н-мечения следующие: 1) он имеет высокую чувствительность и в 10 раз более чувствителен, чем самые чувствительные аналитические весы. 2) он производит незначительные помехи и интракорпоральные метаболиты имеют только небольшие вредные эффекты, следовательно движение и трансформация лекарственного препарата в очень маленькой дозировке могут быть быстро и точно отслежены. 3) легкость в использовании – чтобы провести измерения не нужно отделить меченый препарат от биологических образцов. 4) можно отличить экзогенное вещество от эндогенного, т.к. некоторые вещества являются также нормальными метаболитами, поэтому ³Н-мечение единственный подходящий метод для подобного измерения. 5) он совместим с состоянием организма. Прежде из-за того, что измерительные методы были не достаточно чувствительны, необходимо было вводить избыточную фармацевтическую дозу, которая часто была токсичной, и в этой ситуации нормальные физиологические функции нарушались, поэтому результат измерения не мог показать метаболизм препарата в нормальном физиологическом состоянии. А из-за того, что радиоактивный изотоп обладает высокой чувствительностью, он может быть использован для изучения метаболизма при терапевтической или даже еще более низкой дозировке препарата. 6). Распределение радиоактивных индикаторов можно наблюдать с помощью радиографии. Причина, из-за которой ³Н был выбран в качестве индикатора в том, что органические химические соединения содержат водород, поэтому если ³Н переставить с водородом, это не повлияет на свойства органического химического соединения. К тому же, ³Н существует в избытке, он недорогой, его легко пометить и энергия его радиоактивного луча низка. Он может распределиться по организму, и его токсичность самая низкая в сравнении с другими изотопами. Поэтому радиоактивный ³Н используется для метки масла семян коикс.

4.2. Исследование фармакокинетики

            При нормальном состоянии после всасывания вещества оно будет распределено током крови в каждую ткань и в каждый орган. Вещество из тканей и его метаболиты должны быть перенесены в органы выделения и в последующем выведены из организма. Поэтому концентрация вещества в крови фактически показывает состояние метаболических процессов всасывания, распределения и выведения. Согласно измерению фармакокинетические модели внутривенного препарата ³Н-масло семян коикс и перорального препарата ³Н-масло семян коикс обе соответствуют Открытой Двухячеечной модели:

К12

Центральная модель Периферическая модель

К21

             С помощью анализа фармакокинетических параметров 3 дозировок внутривенного препарата ³Н-масло семян коикс (большой, средней и малой), было замечено, что нет существенной разницы между параметрами. Период полувсасывания (t/2) составил всего 0,135 ч, а период полувыведения (t?/2) составил 16 ч. Очевидно, внутривенный препарат может быстро всасываться, распределяться и быстро оказывать терапевтический эффект в организме. Препарат медленно выводился из крови и его лечебный эффект продолжался сравнительно долгое время.
             Анализ фармакокинетических параметров 3 дозировок (большой, средней и малой) пероральной лекарственной формы ³Н-масла семян коикс показал, что нет существенной разницы между параметрами, период полувсасывания составил 0,3 ч, а период полувыведения – 14 ч. Очевидно, что препарат, введенный перорально, подвергается сравнительно долгому метаболизму и не легко выводится. В свете характеристик полувыведения препарата и способности к накоплению в результате долгосрочного введения, было решено изначально вводить определенную усиленную дозировку, а позже с определенным интервалом поддерживающие дозировки.
           График «время-эффективность» показывает медленно понижающуюся кривую, которая соотносится с медленной способностью препарата высвобождаться из клеток тканей всех органов.

4.3. Биодоступность

          Два фармацевтических препарата, имеющих идентичные химические свойства, не всегда могут оказывать одинаковое биологическое действие. Когда пероральный препарат ³Н-масло семян коикс находился в стадии развития, было важно сравнить его с инъекционным препаратом, эффективность которого была клинически доказана.
          Согласно значению AUC (площадь под кривой) в графике «время-эффетивность» при внутривенном и пероральном применении при одинаковой дозировке, соотношение биодоступности пероральной формы к внутривенной составило 62 %. В соответствии с клиническими требованиями, пероральный препарат, имеющий преимущество из-за легкости применения и удобный для медицинского персонала, был практичен. Тем не менее значение AUC всего лишь показывает общее всосавшееся количество при единичном введении. Согласно измерению, максимальная концентрация перорального препарата (Cmax) в большой, средней и малой дозировках, была соответственно 306,46 мг, 242,26 мг и 178,36 мг, а максимальное время было соответственно 4,96 ч, 4,86 ч и 4, 76 ч.
          И максимальная концентрация и максимальное время – хорошие показатели для оценки всасывания препарата. Клиническая дозировка и время введения препарата могут определяться этими максимальными значениями в разработке клинического препарата.

4.4. Гистологическое распределение

           Распределение препарата в каждом органе после внутривенного введения мыши в разное время показывает, что этот препарат обладает высоким сродством к тканям и имеет долгий период персистенции. Через 10 минут после введения радиоактивность в печени, селезенке и т.д. была гораздо выше, чем в крови и замедлялась при выведении. Этот феномен поддерживает мнение, что концентрированное распределение внутривенной эмульсии препарата в некоторые органы происходит в результате фагоцитоза и удерживания масляных капель фагоцитами в ретикулоэндотелиальной системе. Это так же поддерживает клиническое наблюдение, что препарат оказывает значительное терапевтическое действие на рак легких, печени и почек. Содержание препарата в желудке было ниже, чем в близлежащих органах. Но период его персистенции был длительным, и если препарат вводили в больших количествах много раз в течение длительного времени, он накапливался и в желудке. Следовательно, этот препарат обладает терапевтическим эффектом и при раке желудка. Концентрация препарата в мозге была относительно постоянной, и это показывает, что он может проходить через гематоэнцефалический барьер и оказывать терапевтическое действие. Относится ли этот феномен к болеутоляющему действию, покажут дальнейшие эксперименты. Концентрация препарата в почках была самой высокой через 05,ч после введения, а затем резко снизилась. Начальная концентрация препарата в кишечнике была низкой, но с течением времени она увеличилась. Это могло быть в результате кишечно-печеночной циркуляции.

4.5. Выделение

          Наблюдали присутствие меченого препарата в моче и фекалиях. Процентное отношение выведенного количества внутривенной дозы соответствовало 38 % через 24 ч после применения препарата. Это показало, что внутривенный препарат медленно выводится. Возможные причины, по которым он выводился с желчью, или другими путями, или накапливался в содержимом желудка и кишечника, будут найдены в дальнейших экспериментах.

4.6. Степень связывания с белками плазмы

           Связывание препарата с белками плазмы обратимо. Оно зависит не только от фармакокинетики, но также от интенсивности действия и периода персистенции препарата. Более того, оно часто тесно связано с механизмом действия, эффектами взаимодействия и т.д. препарата. В этом эксперименте через 4 ч после введения препарата степень связывания с белками плазмы ³Н-масла семян коикс составила 80 %. Препарат также имел высокое сродство к другим тканям. В общем, степень связывания с белками плазмы ³Н-масла семян коикс была выше, чем у других препаратов. Таким образом, и период его активности, и период полувыведения были высокими.

4.7. Связь теории трофических каналов с заключением этого эксперимента

            Традиционная китайская медицина считает, что семена коикс сладкие и холодные по природе, и распределяются по каналам селезенки, желудка и легких. Хотя органы, описанные в теории внутренних органов и каналов традиционной китайской медицины, не полностью идентичны западной медицине, однако основные функции их идентичны или похожи. Более того, традиционные эффекты семян коикс сходны с теми, которыми владеет современная фармакология. Традиционная китайская медицина считает, что трофические каналы ориентирует распределение препарата в определенные части тела, т.е. препарат попадает в ту часть тела, где может оказать действие. Характеристики выборочного распределения эффективных компонентов китайской травы in vivo имеют материальную основу для теории трофических каналов и могут дать ключ к разгадке, разъясняющий сущность этой теории. Исследователи показали, что 61 % органов, в которых препарат должен распределяться согласно теории трофических каналов, полностью идентичны органам, которые накапливают наибольшие количества эффективных компонентов. Следовательно, характеристики выборочного распределения эффективных компонентов китайской травы in vivo – важны также для доказательства теории трофических каналов.
         Результат этого эксперимента показывает, что основные действующие компоненты семян коикс распределяются в селезенке, печени и легких, что лишь слегка отличается от путей распределения, которые должны быть согласно теории трофических каналов.
         Тем не менее, эксперимент обеспечивает современную научную основу для традиционной теории трофических каналов.
         Клиническая практика и фармацевтические исследования показали, что препараты, изготовленные из одинаковых химических веществ, часто вызывают разные биологические эффекты. Следовательно, важно изучить биодоступность и фармакокинетику для разработки препаратов, а также для оптимизации производственного процесса и клинических курсов и методов введения, базирующихся на высокотехнологичных стадиях развития новых препаратов.
          Составляющие китайской растительной медицины очень сложны. С точки зрения фармакодинамики большинство исследователей уделяло внимание изучению эффективных компонентов. Из-за того, что китайская растительная медицина традиционно пользуется опытом и имеет мало количественных наблюдений за всасыванием, метаболизмом и т.д. in vivo, фармакокинетические исследования китайской растительной медицины внесли ее в списки как новое направление. Метод ³Н-мечения обеспечивает простой и чувствительный способ исследования всасывания, распределения, выведения и метаболизма эффективных компонентов китайской растительной медицины. В этом эксперименте сделано несколько важных для китайской народной медицины исследований в области в фармакокинетики, что послужило обеспечению нового развивающегося направления в исторической традиционной китайской растительной медицине, и что в дальнейшем поможет создать лекарственную форму масла семян коикс более удобную в клиническом применении и обладающую прекрасными свойствами.

Список литературы

1. Wang Zhencheng: (translator): Drug Processing and Pharmacokinetics. People's Public Health Publishing House 1981: 169-177.
2. Zhu Xiuyuan: Several Basic Concepts about Pharmacokinetics. Development of Physiological Science 1979;10(1): 29.
3. Pharmacokinetics. Science Publishing House 1981: 50-87.
4. Yang Youchun: A Non-Linear Algorithm and Procedure for Calculating Pharmacokinetic Parameters. Pharmacology Journal of China 1983; (4): 217.
5. Ji Xiujuan et al: Metabolism of Ester Alkali>
6. Pan Nanren et al: Absorption, Distribution and Excretion of H³-octanoyl-primaquine in Rat. Pharmacology Journal of China 1982;3(1): 62.
7. Xu Shun et al: Experimental Methodology of Pharmacology, Edition 2. Public Health Publishing House 1991.
8. Songu-rize E, et al. Metabolism and Cardiac Action. J Pharmacol Exp. Ther 1983:226: 65.
9. Comer R et al: Basic Concept of Pharmacokinetics.1979: 162-307.
10. Odani T, Tanizawa H. Takino Y. Studies on the Absorption, Distribution, Excretion and Metabolism. Hem Farm Bull 1983;31:292.
11. Huang MT, et al: Harringtonine, an Inhibitor of Initiation of Protein Biosynthesis. Moll Phormacol 1975; 11: 511.
12.L. K. Paazow et al: Journal of Phamacokinetics and Biophasmacentics 1979;7(5):481.
13. Pirson P, et al: Primaquine Lipsome in Chemotherapy of Experimental Murine Malaria. Am Trop Med Parasol 1980;74(4): 383
14. Strother A, et al: Development of New Derivative of Primaquine by Association with Lysosomotropio Carriers. Bull WHO 1981; 59 (3): 449.
15. Francis ST, et al: Procedure for Preparation of Liposomes with Large Internal Aqueous Space and High Capture by  Reverse-Phase Evaporation.
16. Jaliano RL: The Effect of Particle Size and Charge on the Clearance Rates of Liposomes. Biochem Blophy Res Commun 1975; 63:651.
17. Liu Changxiao: Pharmacokinetics. Hunan Publishing House of Science and Technology 1980:143.
Biological Pharmacy. Jiangsu Publishing House of Science and Technology 1980
18. Chingell CF: Drug Fate and Metabolism 1977;1:188.
19. Tillement JP, et al: Advances in Drug Research 1984;13: 60.
20. Machichan JJ: Clin  Pharmacokinet 1984;9(suppl.1): 32.
21. Almeida IT et al: Biochem Pharmacol 1985;34: 2431.
22. Rowland M and Tozer TN: Clinical Pharmacokinetics, Concepts and Application Lea and Febiger,Phladephia,1980:116-119.
23. Research on Tritium-Labeling of Tanshinoe?A Sodium Subfonate and Its Distribution and Excretion in Rat. Jiangsu Medicine 1978; 4(9): 1-2
24. Cai Xilin: Absorption, Distribution and Excretion of ³H-fleabane in Vivo. Chinese Herb Medicine 1981; 2(2): 26.
25. Zheng Zhenyuan: Research on Pharmacokinetics of ³H-green-chiretta-lactone. Chinese Herb Medicine 1982;13(9): 33-36.
16. Mo Qizhong, Gong Fu: Absorption and Distribution, Excretion of ³H-muctone in Vivo. Chinese Herb Medicine Study 1984; (7): 1-4.
27. Wang Xuefu: Metabolism Process of ³H-ring-buxine-D in Rat. Pharmacy Bulletin 1982;17(4): 6-10.
28. Li xi, Gao Ge: Research on Effective Anticancer Components of Brucea Javanica. Chinese Herb Medicine Bulletin 1979;10 (11):14-17.
29. Zhang Guoming: Pharmacokinetics of Amygdalin in Rabbit. Pharmacology Journal of China 1986;7(5): 460-462.
30. Huo Yushu: Pharmacokinetics and Intracorporal Distribution of  ³H-ginsenoside Monomer RE1. Pharmacology Journal of China 1986; 7(6): 519-521.
31. Lou Yaqin: Pharmacokinetics and Intracorporal Fate of Ligustrazine  Phosphate in Dog and Rat. Journal of Pharmacy 1986;21 (7): 481-487.
32. Huang Jian, Lu Guanwei: Solving of Pharmacokinetic Equation of Two Compartment Model of Intravenous Injection with Portable Computer. Research of Chinese Herb Medicine 1985; (9): 41-43.
33. Li Min: Research on Pharmacokinetics of  ³H-Schizandrin-ether. Pharmacy Bulletin 1984;19(9): 55.
34. Lu Guangwei: Absorption, Distribution, Excretion and Metabolism of ³H-gastrodine in Rat. Journal of Pharmacy 1985;20 (3):167-172.
35. Sun Yang: Metabolism and Transformation of Rheum and Rheum-ether in Rat and Mouse. Journal of Pharmacy College of Nanjing 1985: 16(1): 72.
36. Research on Bioavailabilty and Pharmacokinetics at Different Dosage. Pharmacy Bulletin 1985;20(4): 243.
37. Measurement of Pharmacokinetic Parameters with Pharmacological Methods-Expounding Pharmacokinetic Research on Chinese Herb Medicine.   Chinese Herb Medicine 1985;16(4):161-164.
38. Wang Shimin: Elementary Introduction on Tropism Theory of Chinese Herb Medicine. Sanxi. Traditional Chinese Medicine.1985;1(1): 42-43.
39. Ding Rongshi: Elementary Introduction on Theories of Tropism and Receptor of Traditional Chinese Medicine. Guangdong Medicine 1986; 7(6): 28-30.